厌氧菌检测仪的正常检测范围探讨

　　厌氧菌检测仪的正常检测范围，就是它在什么条件下能给出准数、不会报错。下面把实验室常用的三种检测方式——气体压力法、荧光法和ATP生物发光法——分别说明。

　　一、气体压力法

　　1.原理：把样品放进密封瓶，厌氧菌生长消耗氧气、产生CO₂或H₂，瓶内气压变化由传感器记录。

　　2.正常范围：

　　瓶内初始氧气≤0.1%，可用N₂或CO₂置换。

　　温度35±1℃，低于30℃或高于40℃会延迟生长。

　　接种量10⁴—10⁷CFU/mL；太少无信号，太多气压瞬间升高，软件判为“异常”。

　　检测时间一般24—72小时，超过96小时仍未变化视为阴性。

　　3.注意：瓶塞必须耐压，漏气会导致气压曲线平直，仪器报“无生长”。

　　二、荧光法

　　1.原理：探针只在无氧环境下发光，氧浓度越高荧光越弱。

　　2.正常范围：

　　氧浓度0—50 ppm，超过100 ppm荧光信号基线抬高，结果不可靠。

　　温度25—37℃，温差±2℃内读数变化＜5%。

　　样品浊度＜100 NTU，太浑会吸光，出现假阴性。

　　pH 6.5—7.5，偏酸或偏碱都会让探针猝灭。

　　3.日常校准：用无氧水（加亚硫酸钠）做零点，空气饱和水做100%氧点，每两周一次。

　　三、ATP生物发光法

　　1.原理：裂解厌氧菌后释放ATP，与荧光素酶反应产生光，光强和菌量成正比。

　　2.正常范围：

　　菌量10²—10⁶CFU/mL；低于10²需浓缩，高于10⁶需稀释，否则光强超出检测器线性。

　　反应温度22—28℃，试剂盒内酶对温度敏感，超过30℃活性下降一半。

　　检测时间10分钟，延迟会导致ATP降解，数值偏低。

　　背景光＜100 RLU，实验室灯光或试管划痕都会抬高背景，需在暗室操作。

　　四、干扰因素

　　1.残留消毒剂：含氯或季铵盐会抑制生长，采样前用无菌水或磷酸盐缓冲液冲洗。

　　2.抗生素：若样品来自治疗中的病人，需加入β-内酰胺酶或树脂中和。

　　3.气体比例：CO₂浓度＞20%会抑制某些厌氧菌，需用混合气（80%N₂、10%H₂、10%CO₂）校准。

　　五、质控做法

　　每天做阳性对照（已知厌氧菌株）和阴性对照（无菌培养基）。

　　阳性应在规定时间内报警，阴性全程无信号，偏差＞±10%即停用并检修。

　　气体压力法适合长时间培养，荧光法适合实时监测无氧环境，ATP法适合快速计数。三种方法各有检测上限和下限，只要控制温度、氧气、接种量和背景干扰，就能保证结果在正常范围内。